归档最佳实践

选择归档方法时，重要的是要考虑技术要求，财务成本和每种方法所需的动物数量，以及收回冷冻保存菌株所需的时间。所有归档方法均具有良好的协议（请参阅冷冻保存方案在Infrafrontier网站上）并且胚胎和精子都可以轻松地在液氮干托机中运输（尽管也可以在干冰上发送冷冻的精子）。

选择归档方法的考虑因素

精子冷冻保存和恢复

• 需要的动物数量：两到四个人。
• 需要成本和设备/技术：
  • 冻结精子是低成本 - 简单且便宜的冰点方法，无需特殊设备和最少的培训。
  • 从精子中恢复活动物是高成本 - IVF需要一个专门的孵化器，然后进行胚胎转移。
• 效率：高效率 - 快速，并在恢复时产生大量胚胎。
• 恢复的基因型：仅杂合或野生型。
• 恢复方法：IVF，然后进行胚胎转移（或有时人工授精）。
• 特殊要求：卵母细胞供体。
• 质量控制：
  • 冻结之前：
    • 在冷冻保存之前确认库存动物的基因型。
    • 检查冷冻保存点的精子运动和体积。
  • 冻结后：
    • 测试与一名雌性在IVF中解冻精子。
    • 理想的基因型产生的胚胎。
    • 如果可能的话，将剩余的胚胎冻结。

使用自然交配的超排卵的胚胎冷冻保存

• 需要的动物数量：10 - 20位女性加三到五个芽雄。
• 需要成本和设备/技术：
  • 冷冻胚胎可能是高成本 - 这需要受控的冰柜。胚胎玻璃化是一种较低的成本选择。
  • 胚胎的恢复是低成本 - 涉及解冻胚胎的胚胎转移。
• 效率：低效率 - 使用大量动物，某些菌株不能很好地膨胀。
• 恢复的基因型：任何基因型。
• 恢复方法：胚胎转移（手术或非手术）。
• 特殊要求：生成冷冻保存的库存。
• 质量控制：
  • 冻结之前：在冷冻保存之前确认库存动物的基因型。
  • 冻结后：
    • 测试解冻一根稻草和培养物为胚泡阶段（对于已知在冷冻保存后恢复动物问题的菌株，可以获得胚胎转移和活幼犬以确认可行性，但不建议将其作为常规实践）。
    • 解冻后的基因型胚胎。

胚胎冷冻保存使用IVF*使用超排除

• 需要的动物数量：六到10个女性，以及一到两名男性的精子。
• 需要成本和设备/技术：
  • 冷冻胚胎可能是高成本 - 需要专门的孵化器和控制速率冰柜。胚胎玻璃化是一种较低的成本选择。
  • 胚胎的恢复是低成本 - 涉及解冻胚胎的胚胎转移。
• 效率：中等效率 - 平均需要六到12只动物来保留菌株。
• 恢复的基因型：任何基因型。
• 恢复方法：胚胎转移（手术或非手术）。
• 特殊要求：生成冷冻保存的库存。
• 质量控制：
  • 冻结之前：在冷冻保存之前确认库存动物的基因型。
  • 冻结后：
    • 测试解冻一根稻草和培养物为胚泡阶段（对于已知在冷冻保存后恢复动物问题的菌株，可以获得胚胎转移和活幼犬以确认可行性，但不建议将其作为常规实践）。
    • 解冻后的基因型胚胎。

*新技术/试剂越来越多地可提高超排卵的效率，例如使用抑制素抗血清增加卵的数量（高卵形）。这些技术可以减少产生足够的胚胎用于IVF/冷冻所需的小鼠数量，但是可能存在相关的福利问题。

动物的年龄

• 女性应年满10至24周。雄性可能年龄较大，但获得优质精子的机会下降。精子可以从八周龄开始冷冻，但精子体积通常较低，尤其是在更复杂的杂交和某些背景中。
• 女性应为理想的三到六周。女性最多可以使用〜24周，但是胚胎的受精/恢复将随着年龄的增长而显着降低，需要使用更多动物。

保持记录中

• 重要的是要对等位基因，背景和表型保持准确，全面的应变笔记（请参阅鼠标护照指南建议）。
• 保留使用的冻结方法的记录，因为这可能会随着时间而变化。
• 考虑将来要冻结一些组织，以防您将来要基因型。

什么时候冻结

• 到达/创造菌株时，将精子从一到两名雄性冻结。
• 在折叠菌株时，每三到五代冻结一只到两名雄性的精子。
• 对于复杂的育种，请考虑冻结中间育种步骤的价值。
• 一旦准备就绪（例如，多重，反涂），冻结胚胎和精子（请参阅归档方法的时间表）。

贮存

• 确保您的样品分为两家银行，最好是两个站点。
• 鉴于吸管中的少量，建议将液相用于储存。

质量控制措施

• 遵循建议，始终在冷冻之前和之后执行质量控制检查很重要选择归档方法的考虑因素。

请参阅下面的示例**，通常建议使用雄性和胚胎数量来安全地存档应变，而无需将任何动物保留在活菌群中。应当指出的是，冻结的精子将允许大多数菌株和等位基因的回收，但是这种方法需要更长的时间才能在其实验状态下恢复其多相关菌株的菌株。

**示例基于C57BL/6J基质；其他背景的要求和时间表可能会有所不同。

动物数量和预期的时间表，用于归档不同类型的GA菌株

单等位基因GA菌株 - 杂合子

• 胚胎数：无
• 男性人数：两个
• 冷冻保存的估计时间：如果有野生型女性的供应，那么冻结的时间仅取决于男性的年龄。当雄性达到10周以上时，可能会冻结。
• 估计从精子中恢复成人的时间：成人10周内可用。
• 估计从胚胎中恢复成人的时间：不适用。

单等位基因GA应变 - 纯合子

• 胚胎数量：50 - 100
• 男性人数：两个
• 估计的冷冻保存时间：需要六到10周的时间来繁殖足够的女性以进行IVF/天然交配，或者如果需要雄性需要年龄的IVF或重复繁殖，则需要更长的时间。
• 估计成人从精子中恢复的时间：最小20周 - 非常取决于基因分型方案，可能接近30周。
• 估计从胚胎中恢复成年人的时间：成年人在10周内可用（如果纯合胚胎冷冻）。

多个等位基因菌株 - 杂合子

• 胚胎数：50 - 250

• 男性人数：两到四

• 冷冻保存的估计时间：如果有野生型女性的供应，那么冻结的时间仅取决于男性的年龄。
• 估计从精子中恢复成人的时间：可能会在10周内提供成人，尽管在一只动物中获得所有等位基因可能需要长达20周。
• 估计从胚胎中恢复成人的时间：成人10周内可用。

多个等位基因菌株 - 纯合子

• 胚胎数：100 - 250
• 男性人数：两到四
• 冷冻保存的估计时间：可能长达20周，以繁殖足够的女性，用于多轮IVF。（更复杂的菌株和其他背景的菌株通常对超排卵反应不佳）。
• 估计成人从精子中恢复的时间：取决于菌株的复杂性，这可能需要一年时间。
• 估计从胚胎中恢复成人的时间：成人10周内可用。