用于测定破伤风毒素活性的破伤风敏感细胞系的研制

破伤风和肉毒杆菌疫苗用于人类和牲畜。在疫苗生产过程中，必须对产品进行几个阶段的残余神经毒性测试。目前还没有简单敏感的定量测定方法来测量神经毒素活性，迫使制造商和监管机构使用实验室啮齿动物进行生物测试，通常具有致命终点和不可接受的动物痛苦程度。理想的动物替代品是一种能够忠实地代表动物的所有生物步骤的细胞系在活的有机体内破伤风和肉毒毒素的作用，包括受体结合、内化和切割破伤风毒性的最终靶点VAMP2，从而阻断神经传播。我们最近证明，与其他广泛使用的神经元细胞系不同，分化的SiMa细胞能够结合破伤风毒素受体结合域。然而，免疫印迹实验表明，SiMa细胞不表达破伤风和肉毒杆菌D型毒性的最终靶点VAMP2。

我们现在已经生成了一个新的稳定的携带vamp2 -绿色荧光蛋白(VAMP2-GFP)融合蛋白的SiMa细胞系。使用脂质检测，荧光显微镜和免疫印迹法，我们已经证明，类似于破伤风毒素的作用在活的有机体内，破伤风内肽酶结构域可以在我们的新细胞系内切割VAMP2-GFP蛋白，从而完成中毒所需的缺失步骤。我们建议开发一种检测破伤风活性的灵敏测定方法。我们计划通过首先获得完全克隆的VAMP2-GFP SiMa细胞系来实现这一目标，从而提供稳定和遗传同质的细胞模型。使用针对GFP和VAMP2的抗体，我们将开发一种用户友好和强大的夹心ELISA检测方法，用于检测破伤风神经毒素，这是对人类健康的主要威胁。最终，这种基于细胞的检测方法有很大的潜力在全球范围内消除动物痛苦，减少和取代动物检测方法。

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